简介:
全自动蛋白质表达定量分析系统,突破了传统WB实验步骤繁琐、上样量大、无法准确定量等技术瓶颈。系统基于毛细管电泳免疫分析技术,无需制胶,无需转膜,自动完成微量蛋白上样、电泳分离、蛋白固定、抗体孵育、发光信号检测等步骤,整个实验流程耗时短(≤3小时),实验结果重复性高,覆盖检测分子量范围2-440kD,对WB实验可实现自动化、标准化、微量化检测。

主要功能及特色:
1.支持如流式分选细胞、类器官、激光显微切割样本、外泌体、临床穿刺样本等珍贵稀有样本靶蛋白分析。该系统创新性使用400nl毛细管为实验体系,上样体积每孔只需3ul,总蛋白量约1ug左右,即可实现目标蛋白的准确定量。样本里需求是传统WB的几分之一到几十分之一,可实现珍贵稀有样本内源蛋白质表达分析。

2.系统无需转膜,轻松实现大小分子量蛋白检测,小至2kD的多肽、细胞因子、神经递质和激素等,大到440kD蛋白质,实现传统蛋白免疫印迹难分离和定量极限分子量蛋白质,而且提供全膜实验结果。
3.系统具有高重复性结果,精确控制上样量、孵育时间和清洗等步骤,全自动化完成整个检测流程,消除了传统WB实验中人员手动操作误差,具有高重复性和方法精密度,方便不同实验室、或同一实验室不同人员之间的数据对比研究。

4.系统可实现目的蛋白精准的定量分析,包括相对定量和绝对定量,采用Compass软件进行数据分析,以电泳峰形图和泳道图呈现。峰形图可计算峰高、峰面积、信噪比等数据,进而对目的蛋白进行定量分析。数据自动保存在软件中,随时可调取,解决科研数据造假、记录缺失等问题。

主要应用:
1.类器官蛋白质表达分析
类器官蛋白质组学研究和蛋白质表达验证一直是难点,日本庆应大学医学院Toshiro Sato教授团队,从2018年起,利用Digital WB技术相继在Cell和Cell Stem Cell等杂志发表多篇有影响的文章。其建立了胰腺癌、胃癌及人肠道类器官库,全面阐述了相关肿瘤发生及靶向Wnt治疗肿瘤的可行性。同时,也提出了改良的肠道类器官培养条件下,人体肠道组织和疾病建模的可行策略。

2.细胞与基因治疗
德国慕尼黑工业大学和德国心血管研究中心科学家利用AAV介导的基因编辑技术,在体内恢复杜氏营养肌不良(DMD)模型中骨骼肌功能和改善心肌衰竭。下图利用Digital WB检测hiPSC衍生的骨骼肌成肌细胞和心肌细胞中抗肌萎缩蛋白(Dystrophin)表达。

3.小分子药物-蛋白降解剂
蛋白裂解靶向嵌合体(PROTAC)是一种新兴的药物分子设计形式,靶蛋白结合配体与E3连接酶结合配体通过连接子进行共价连接。这样一个双重功能分子,一端可结合目标蛋白,另一端结合E3连接酶,将两者形成靶蛋白-PROTAC-连接酶三元复合物,通过E3连接酶进行泛素化,从而降解目标蛋白。辉瑞公司科学家筛选11种PROTAC化合物文库,使用Digital WB检测靶蛋白降解量效关系及时效关系,并进行组织样本蛋白表达定量分析。

4.外泌体蛋白质定量
外泌体样品十分珍贵,Digital WB适合外泌体样本蛋白分析,每一个样本体积仅需3ul,可实现外泌体标志物和相关蛋白定量。
