细胞培养间操作

1、实验前用75%酒精擦净台面及四周，放好需用的实验器材及各种溶液，开紫外灯消毒30分钟。

2、进入无菌室前应用肥皂洗手，然后用75%酒精球棉将手擦干净。

3、进入无菌间必须穿的专用隔离衣、帽及拖鞋、口罩，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。

4、使用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用的器皿，不能放置再用，消毒用器皿放置不得超过一周。

5、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位及试管或平皿边。

6、接种样品必须在酒精灯前操作，接种样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。

7、实验完毕，清理实验台面。

8、用过的器材进行整理，污染细菌的器材需经高压灭菌或煮沸消毒。

9、实验者在实验后用肥皂清洗双手或将双手浸泡于0.2%过氧乙酸溶液中3分钟，用清水冲洗，再用肥皂清洗双手。

10、换下的隔离衣、帽等进行高压消毒，拖鞋放回原处。

11、用毕，再开紫外灯消毒30分钟。

12、无菌室和缓冲间每周大扫除一次，保持整洁。

13、每月进行一次紫外线对空气消毒效果测定，如灯管发黑，超过使用期限，及时更换紫外灯管。

酒精灯使用规范

(1)新购置的酒精灯应首先配置灯芯。灯芯通常是用多股棉纱线拧在一起，插进灯芯瓷套管中。灯芯不要太短，一般浸入酒精后还要长 4—5cm。对于旧灯，特别是长时间未用的灯，在取下灯帽后，应提起灯芯瓷套管，用洗耳球或嘴轻轻地向灯内吹一下，以赶走其中聚集的酒精蒸气。再放下套管检查灯芯，若灯芯不齐或烧焦都应用剪刀修整为平头等长。

(2)新灯或旧灯壶内酒精少于其容积1/4的都应添加酒精。酒精不能装得太满，以不超过灯壶容积的2/3为宜。（酒精量太少则灯壶中酒精蒸气过多，易引起爆燃；酒精量太多则受热膨胀，易使酒精溢出，发生事故。）添加酒精时一定要借助个小漏斗，以免将酒精洒出。燃着的酒精灯，若需添加酒精，必须熄灭火焰。决不允许燃着时加酒精，否则，很易着火，造成事故。万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，要立即用湿棉布铺盖灭。用完酒精灯，火焰必需用灯帽盖灭，不可用嘴吹灭，以免引起灯内酒精燃烧，发生危险。

(3)新灯加完酒精后须将新灯芯放入酒精中浸泡，而且移动灯芯套管使每端灯芯都浸透，然后调好其长度，才能点燃。因为未浸过酒精的灯芯，一经点燃就会烧焦。

(4)点燃酒精灯一定要用燃着的火柴，决不能用一盏酒精灯去点燃另一盏酒精灯。否则易将酒精洒出，引起火灾。

(5)加热时若无特殊要求，一般用外焰来加热器具。加热的器具与灯焰的距离要合适，过高或过低都不正确。与灯焰的距离通常用灯的垫木或铁环的高低来调节。被加热的器具必须放在支撑物(三脚架、铁环等)上或用坩埚钳、试管夹夹持，决不允许手拿仪器加热。

(6)加热完毕或要添加酒精需熄灭灯焰时，可用灯帽将其盖灭，如果是玻璃灯帽，盖灭后需再重盖一次，放走酒精蒸汽，让空气进入，免得冷却后盖内造成负压使盖打不开；如果是塑料灯帽，则不用盖两次，因为塑料灯帽的密封性不好。决不允许用嘴吹灭。不用的酒精灯必须将灯帽罩上，以免酒精挥发，因为酒精灯中的酒精，不是纯酒精，所以挥发后，会有水在灯芯上，致使酒精灯无法点燃。

(7)酒精灯不用时，应盖上灯帽。如长期不用，灯内的酒精应倒出，以免挥发；同时在灯帽与灯颈之间应夹小纸条，以防粘连。

(8)要用酒精灯的外焰加热，给玻璃仪器加热时应把仪器外壁擦干否则仪器炸裂，给试管中的药品加热，首先必须预热，然后在对着药品部位加热。加热时不能让试管接触灯芯，否则试管会炸裂。

FACSCalibur 流式细胞仪操作规程

开机程序

检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足够空间容纳本批标本排弃的废液。依次打开流式细胞仪 FACSCalibur 主机开关、电脑开关，打印机。

气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY 状态，做 Prime，以排除管路中气泡。

二、运行 FACSComp 软件、检查仪器状况

1、 制备三色标准微球样本。

2、 打开 FACSComp 软件，选择所需校正内容，输入微球的批号。

3、 功能键设置在“RUN”，上样。

4、 仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。

5、 FACSComp 软件运行完毕，显示结果通过测试。

6、 打印校正结果，退出 FACSComp 程序。

三、样本检测

1、 打开相应软件，做好必要设置，并按要求输入样本资料。

2、调出实验获取条件，并做设置条件的优化。

3、功能键设置在“RUN”，并根据实验要求选择流速，按设置顺序上样。

4、点击“Acquire”命令，贮存获取的数据文件，并对数据进行分析处理，打印实验报告。

5、样品检测完毕，点击“Quit”命令，退出相应软件。

四、关机程序

1、用 4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入 2ml。

2、将样品支撑架置于中位，以 HI RUN 5 分钟，使内管吸入 2ml。

3、将样品换成蒸馏水重复 1-2 步。

4、放置盛有 1ml 蒸馏水的试管于样品支撑架上。

5、选择 Standby 模式 10 分钟。

6、退出所有应用软件，关闭电脑，再关掉仪器。

流式细胞仪违规操作处理

1、流式细胞仪使用之后未登记或者登记使用记录失实者，三次以上将取消流式细胞仪独立操作资格。

2、流式细胞仪的鞘液桶没有加挡板就处于加压状态导致鞘液桶形变，将由该学生所在的实验室承担该耗材的购买费用。

3、流式细胞仪使用过后未清洗仪器者，封禁使用权限一周，三次以上将取消流式细胞仪独立操作资格。

4、流式细胞仪在清洗的过程中如有清洗液抽干导致荧光杯损坏者，应提交《仪器使用违规记录》，由导师签字，并承担配件更换的相应费用。

5、其他违规操作，根据情况酌情处理。

显微镜及成像类仪器违规操作的具体处理办法

因显微镜或成像类仪器，需要激光管或汞灯作为光源，来激发捕获数据图像。因此根据光源的使用特性和使用寿命损耗情况，这类仪器有其特定的操作规定：

1、预约时，需严格遵守仪器开关机时间间隔要求，未按要求操作者，取消仪器独立使用资格，并在使用记录上增加 2 小时；

2、保持实验室、仪器清洁，将样片玻片上下表面清理干燥洁净后再用显微镜观察，不得让实验样品溶液污染显微镜；

3、如仪器空开，则将空开时间加入该生的仪器使用记录中，如空开责任分属 2 个不同课题组的人员承担，则按主要责任人付70%，次要责任人付30%计。

4、浪费镜头油容易造成镜头污染发霉损坏，在使用记录上增加1小时；

5、有独立操作权限的人员在实验结束后，应清理油镜、关闭激光器、关机并关闭房间内人工环境系统。

6、使用完仪器离开显微镜室请确保仪器、人工环境系统不能空开，如登陆网络预约系统之后继续有学生使用仪器，必须等来人接手仪器后才能离开；

7、无独立操作权限的人员不能自己操作仪器的开闭；不要自己清理物镜；不要自己改变人工环境系统的控制。

8、其他违规操作，根据情况酌情处理。违反以上操作规定，将取消个人仪器使用资格，如造成仪器损坏或隐患者，需提交《仪器使用违规记录》，由导师签字，并将根据具体情况由该课题组按比例承担仪器维修费用。

Olympus FV1200 MPE 双光子共聚焦显微镜简明操作流程

一、开机

1. 打开两个插线板总电源，开电脑，从左至右打开电源（汞灯长按打开）。

2. 拧开总控器钥匙（1 把）。

3. 待共聚焦激光器指示灯不闪烁，拧开钥匙（2 把），关闭室内灯，打开软件。

4. 若需双光子激发，从软件上打开飞秒激光器电源，待锁模后方可使用。

二、光路准备

1. 确保室内灯已关闭，打开 FV10-ASW 软件。

2. 将所有的 RXD 和 TXD 和 GaAsp 通道勾掉不选，以避免外源性光源对这些高灵敏度检测器的损伤。

3. 将显微镜的光路切换至眼睛，将显微镜滤光片控制盒切换至 DICT。

三、寻找目标

1. 将样品置于载物台上，若用水镜，需要用滴管在盖玻片上滴加一滴水。

2. 软件上找到button 打开明场光源，使用准焦螺旋聚焦，直到看到样品为止。

3. 使用 XY 电控轴将目标移至视野正中央，调节视场光阑使光照均匀清晰。

四、数据采集

1. 观察；2. 选择染料；3. 扫描图像，保存已采集的图像。

五、关机

1. 物镜 Escape，无水乙醇擦拭镜头。

2. 滤光转轮放至 DICT。

3. 软件上一定要关闭双光子激光器。

4. 关闭软件。

5. 拧闭总控器（1 把）和共聚焦激光器钥匙（2 把）。

6. 从右至左关闭电源（其中汞灯长按关闭）。

7.关闭电脑。

8.待汞灯 300 秒倒计时完毕，关闭两个插线板总电源。

Leica TCS SP5 Ⅱ 单光子共聚焦显微镜简明操作规程

一、开机

1. 依次打开 “PC Microscope”、“Scanner Power”及“Laser Power”三个圆形按钮，然后将“Laser Power”按钮右侧的激光开关钥匙（Laser Emission）顺时针旋转至“On-1”位置。

2. 打开显微镜电源，及荧光电源。

3. 双击电脑桌面上的“LAS AF”图标启动徕卡共聚焦软件。

4. 点击“OK”以打开软件。

二、在显微镜下观察样品

1. 选择合适的物镜，可通过显微镜主机右侧的物镜转换按钮，或软件中的“Objectives”键进行选择。

2. 将样品置于载物台，在明场条件下选择合适的视野，通过显微镜主机右侧的调焦按钮或旋钮调节至合适的 z 轴平面， 通过显微镜主机左侧的“INT”功能键调节光强度。

3. 按“TL/IL”功能键转换至荧光观察方法，通过显微镜前面板的按钮选择合适的荧光滤块，进行样品的荧光观察。

4. 观察完毕后，按显微镜前面板上的“SHUTTER”键以保护样品。

三、采集共聚焦图像

1. 点击工具栏下方的“Configuration”，再点击“Laser”，勾选所需激光；

2. 点击“Aquire”进行光路设置；

3. 选择投射光检测器；

4. 选择扫描模式；

5. 设置扫描参数；

6. 预览图像；

7. 优化扫描参数；

8. 采集图像。

四、关机

1. 保存已采集的图像，关闭显微镜荧光光源。

2. 若使用过油镜，需用无水乙醇清洁镜头。

3. 关闭 LAS AF 软件，将电脑桌右侧“Laser Power”按钮右侧的激光开关钥匙逆时针旋转 90 度至“On-0”位置，关闭 “Scanner Power”按钮。

4. 在电脑上进行图像数据的输出。注意：使用空白光盘刻录，不得使用任何其他形式的移动存储介质。

5. 关闭电脑后，关闭“PC Microscope”按钮。

6. 风扇停止后（关闭激光开关钥匙约 5 分钟后），关闭“Laser Power”按钮。记录使用时间、使用人情况、仪器状况等信息。

Nano Drop One 操作规范

注意事项：请勿卸下仪器护盖。卸下护盖会使操作员接触尖锐边缘和脆弱的光线电缆。卸下护盖将会导致仪器保修失效。

Nano Drop One 分光光度计设计用于符合我们规格的室内环境操作。有关详细信息，请参阅仪器的场地准备指南。使用过程中请遵循以下防范措施避免损坏您的 NanoDrop 分光光度计：

1、使用适用于您的供电设备的接地电源线。如果随附的电源线不兼容或损坏，请联系工作人员。

2、请勿卸下仪器护盖

3、检测臂组件下面的板采用热钢化玻璃制成。液晶显示屏采用经过热处理的化学钢化玻璃制成。两者均坚固耐用，不易损坏。但是，如果板或显示屏破裂或损坏，请联系我们进行更换。

4、使用与仪器相容的溶剂（请参阅危险物质）

5、不要在基座上使用氢氟酸（HF）。氟例子会永久损坏石英光纤电缆。

6、为了防止溢漏导致的损坏，将液体容器保持远离仪器。

7、不要在一起附近使用喷射器或喷雾瓶，因为液体会流入仪器并可能导致永久性损坏。

8、不要试图取出下基座周围的隔膜，因为该隔膜永久固定在仪器上。

9、避免让盐酸、醇、漂白剂、丙酮或其他任何溶剂留在隔膜上超过一分钟，否则，将会导致密封件松动。如果隔膜松动，请联系工作人员。

HBS-1096 酶标仪操作规范

1、开机

开电源开关,目测液晶屏是否正常显示菜单或图标，酶标仪开机时会进行参数的初始化，时间大约 1 分钟,期间请勿操作使用。

仪器若无异常现象,每次开机后应预热 5-15 分钟后再开始测量，冬季低温情况下仪器工作 30 分钟后将达到最佳状态。操作时，注意每次点击按钮后稍待仪器完成该次动作，未完成前快点按钮无效。

2、主界面

仪器具备吸光度测量、定性分析、定量分析、抑制率测量、 数据管理、系统设置等功能菜单按钮。

吸光度测量适用只需测量样本吸光度的项目,仅需设置读板波长或采用上次默认波长即可进行项目的测量。

主界面按[吸光度]按钮进入:

1.通过方向按钮选择测量所需波长;

2.按[开/关]仓按钮,小心放置好待测酶标板，注意防止液体泼洒;

3.按[读板]按钮进行测量,仪器测量期间请勿按触摸屏进行其它操作;

4.测量完成数据会自动显示在液晶屏上;

5.可按[存储]按钮进行本次测量数据的存储，具体操作可参阅存储章节;

6.可按[打印]按钮进行本次测量数据的打印;

7.可点击 BLK 值的数字部分,手工输入空白对照值，输入完成按小键盘上的[Enter]键,仪器会自动扣除 BLK 值后再次显示到液晶屏上;

8.按[OD 值]按钮，会清除刚输入的 BLK 值,恢复原始的 OD 值显示在屏幕上;

9.按[返回]按钮，可返回至主界面

高速离心机操作规程

用途：用于样品的前处理

操作步骤：

打开仪器后面的电源开关

设定 SPEED 速度，TIME 时间，TEMP 温度，速率（ACC/DEC），保存在仪器左边的数字 1~6 的程序中（按住 4 秒）

垂直放入离心机转头，自动锁定

按 OPEN 开盖，对称放入离心管，旋紧转头盖子，选择左边程序（1~6），按 START 启动，

待仪器自动停止后，按 OPEN 开盖，取出离心管

使用完，按下绿色PUSH按钮，垂直取出转头，擦拭离心机内壁和转头

关闭仪器后面的电源开关

注意事项：

离心管需对称放置

离心管中样品量必须一致，并且不要超过离心管的 3/5 仪器在运行时切勿强行停止，让其按照程序自动停止离心结束，等待制冷压缩机停止运行，再关机。擦拭离心机内壁和转头，保持干净

离心机违规操作处理办法

由于这类仪器存在一定的危险性，所以对操作要求较为严格。

1、对于使用仪器出现 1 次违规操作者，直接封禁该生使用权限一周；

2、出现 2 次违规操作者，取消该学生独立操作资格。一周后方可重新申请培训，经考察后再考虑通过仪器使用资格。

3、对于离心管没有配平、忘记盖离心机转子的盖子等存在安全隐患或对仪器造成损坏的违规行为。出现 1 次，则即时取消该学生的独立操作资格。提交《仪器使用违规记录》，由导师签字，并承担日后仪器维修相应费用。

4、其他违规操作，根据情况酌情处理。

高压灭菌锅操作说明

高压灭菌锅使用前要水加到水位线；

将需灭菌的培养基、蒸馏水或其它器皿放入灭菌锅内，关闭锅盖，检查排气阀、安全阀状态；

打开电源，检查参数设置是否正确，然后按下“work”键，灭菌锅开始工作；

自动派冷气，到 105℃时，底部排气阀门自动关闭，然后压力开始上升；

压力升至 0.15MPa（121℃）时，灭菌锅再次自动放气，然后开始记时，一般培养基灭菌 20min，蒸馏水灭菌 30min；

达到规定的灭菌时间后，关闭电源，打开放气阀缓慢放气；

当压力指针降至 0.00MPa 时，放气阀无蒸汽排除时，方可开启锅盖；

注意事项

1、汽未放尽前，不得开启高压锅；

2、如果灭菌后的培养基在锅内不及时拿出，需在蒸汽放尽后将锅盖打开，切忌将培养基封闭在锅内过夜；

3、压力表指针在 0.05MPa 以上时，不能过快放汽，以防止压力急速下降，液体滚沸，从培养容器中溢出；

4、操作过程，请注意安全，小心烫伤。